Кулебякина Мария Александровна — м.н.с. НИЛ генных и клеточных технологий кафедры биохимии
119192, г. Москва, Ленинские горы, 1
Maria A. Kulebyakina — junior researcher at Gene and cellular technology research laboratory
119192, Moscow, Leninskiye Gory, 1
Смирнова Анастасия Сергеевна — студентка 2-го курса магистратуры по регенеративной биомедицине
119192, г. Москва, Ленинские горы, 1
Anastasia S. Smirnova — Master’s student in Regenerative Biomedicine
119192, Moscow, Leninskiye Gory, 1
Попов Владимир Сергеевич — к.б.н., заведующий лабораторией НИЛ трансляционной медицины; в.н.с.
119192, г. Москва, Ленинские горы, 1
Vladimir S. Popov — PhD, head of Translation medicine research laboratory; lead researcher
119192, Moscow, Leninskiye Gory, 1
Еремичев Роман Юрьевич — к.м.н., м.н.с. лаб. генно-клеточной терапии
119192, г. Москва, Ленинские горы, 1
Roman Y. Eremichev — PhD, junior researcher at Gene and cell therapy laboratory
119192, Moscow, Leninskiye Gory, 1
Макаревич Павел Игоревич — к.м.н., зав. лаб. генно-клеточной терапии; доцент кафедры биохимии
119192, г. Москва, Ленинские горы, 1
Pavel I. Makarevich — MD, PhD, head of Gene and cell therapy laboratory; assistant professor at Biochemistry and Regenerative Medicine department
119192, Moscow, Leninskiye Gory, 1
Целью работы было проверить, изменяется ли уровень экспрессии генов Hoxa10 и Hoxa11, специфичных для эндометрия, в матке мыши после родового повреждения эндометрия, а также предположить механизм, по которому экспрессия данных генов может возрастать в стромальных клетках эндометрия в результате повреждения.
Методы. В исследовании использовали молодых (возрастом 8–10 недель) мышей дикого типа инбредной линии С57BL6; экспрессию генов Hoxa10 и Hoxa11 в тканях матки оценивали до родов, а также спустя 4 и 24 ч после родов. Гипоксию моделировали in vitro в первичных культурах стромальных клеток эндометрия человека добавлением 200 мМ CoCl2. Ингибирование системы активного деметилирования ДНК проводили с использованием ингибитора Bobcat339. Оценку уровня экспрессии генов Hoxa10 (HOXA10) и Hoxa11 (HOXA11) проводили методом ПЦР в реальном времени, сопряженной с обратной т ранскрипцией, а также методом вестерн-блоттинга.
Результаты. В течение первых суток после родов в тканях матки мыши возрастает экспрессия генов Hoxa10 и Hoxa11. В стромальных клетках человеческого эндометрия при моделировании гипоксии возрастает экспрессия генов HOXA10 и HOXA11, а ингибирование системы активного деметилирования ДНК препятствует возрастанию экспрессии данных генов в модели гипоксии.
Заключение. Впервые получены данные о том, что экспрессия генов Hoxa10 и Hoxa11 возрастает в матке мыши после повреждения эндометрия в модели in vivo. Кроме того, в экспериментах in vitro показано, что апрегуляция данных генов в результате повреждения может обуславливаться изменением их экспрессии в стромальных клетках эндометрия, которая, в свою очередь, может быть вызвана гипоксией и вызываемыми ей эпигенетическими изменениями, связанными с работой системы активного деметилирования ДНК.
Aim. The work was aimed to test whether the expression levels of endometrial-specific Hoxa10 and Hoxa11 genes in the mouse uterus change after endometrial injury caused by giving birth, and to suggest a mechanism by which these genes can be upregulated in endometrial stromal cells after injury.
Methods. The study was performed using young (8–10 weeks old) wild-type mice of the C57BL6 line; Hoxa10 and Hoxa11 gene expression in uterine tissues was assessed before delivery, as well as 4 hours and 24 hours after delivery were also used in the work. Hypoxia was modeled in vitro using human endometrial stromal cells by adding 200 mM CoCl2. Inhibition of DNA active demethylation system was performed using the Bobcat339 inhibitor. The level of expression of the Hoxa10 (HOXA10) and Hoxa11 (HOXA11) genes was assessed by real-time PCR coupled with reverse transcription, as well as by Western blotting.
Results. During the first day after birth, both Hoxa10 and Hoxa11 gene expression increases in mouse uterine tissues. In the stromal cells of the human endometrium, during hypoxia modeling, HOXA10 and HOXA11 gene expression increases, and inhibition of the active DNA demethylation system prevents noted increase in the hypoxia model.
Conclusion. We have shown for the first time that the Hoxa10 and Hoxa11 gene expression increases in vivo in the mouse uterus after endometrial damage, and also demonstrated in in vitro experiments that upregulation of these genes in endometrial stromal cells after damage can be caused by hypoxia-induced epigenetic changes associated with the operation of the active DNA demethylation system.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.